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Nel mese di giugno 2008, Ubisoft conferma lo sviluppo di Assassin's Creed 2.

Il 1 giugno 2009 è stato mostrato un trailer di 4 minuti durante la conferenza di Ubisoft. Il 2 giugno 2009, durante la conferenza di Sony è stato mostrato il trailer ufficiale del gioco e resa nota la data d'uscita: 17 novembre 2009.



Il protagonista di Assassin's Creed II è un nobile fiorentino antenato di Desmond Miles e discendente di Altair, di nome Ezio Auditore. L'avventura inizierà nell'anno 1486 che corrisponderà all'epoca del rinascimento e oltre ad essere dotato di due lame, il "nuovo Altair" non si è sottoposto al rito del taglio delle dita per permettere la fuoriuscita delle lame dai pugni, quindi le userà in maniera diversa da Altair. Nel corso dell'avventura è possibile vedere alcune delle location che ospiteranno questo nuovo episodio e sono: la Basilica di San Marco, il Canal Grande e il Ponte di Rialto, ma potremo visitare anche alcuni luoghi della campagna Toscana. Ezio Auditore si potrà spostare nei seguenti luoghi o a piedi o a cavallo, mentre a Venezia avrà la possibilità di nuotare nei canali e restare immerso finché il suo fiato glielo permetterà. Ci saranno nuovi metodi di gameplay che il protagonista potrà utilizzare come ad esempio uccidere un nemico silenziosamente (se, per esempio, un soldato vedrà qualcosa muoversi dentro un covone di fieno e si avvicinerà, Ezio potrà ucciderlo silenziosamente con una lama e mettere il cadavere dentro il covone in modo che non venga trovato) e potrà avere nuove armi a disposizione tra cui un'ascia, una mazza, un martello, una lancia, un paio di spade e due diversi tipi di piccole lame, tutte dotate di caratteristiche diverse. È stata implementata anche la funzione grazie alla quale sarà possibile sottrarre le armi al nemico ucciso, permettendo così una vasta gamma di scelta di armi. La giornata sarà divisa fra giorno e notte e avrà 16 missioni differenti fra di loro che scompariranno e compariranno a seconda della reputazione di Ezio ,nel corso del gioco si incontreranno nuovi personaggi storici fra Machiavelli, Caterina Sforza e Lorenzo de Medici. Siccome è stato confermato il laboratorio di Leonardo da Vinci, vedremo questo personaggio insieme alla Gioconda. Si potranno utilizzare anche le sue invenzioni per planare da un tetto all'altro. Nei vari scenari si potranno trovare oggetti nascosti come emblemi, statue ed altro che andranno a sbloccare contenuti bonus.